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關(guān)于如何選擇基因診斷技術(shù)有兩層含義:第一,什么情況下選擇基因診斷;第二,如果選擇了基因診斷,應當采用哪一種基因診斷技術(shù)。以下分別介紹。
1.選擇基因診斷的依據。
1)基因診斷可以彌補免疫學(xué)檢測技術(shù)的缺陷 免疫學(xué)診斷主要依賴(lài)于抗原抗體反應,應用于臨床只能在體內產(chǎn)生抗體以后,也就是病程的中期及晚期,不能應用于早期診斷,往往由于地區的流行及個(gè)體的差異出現非特異交叉反應,雖然目前已制備了針對多種抗原的單克隆抗體,使抗原抗體檢測技術(shù)的特異性及敏感性有所提高,但還是解決不了方法上的一些問(wèn)題。臨床上有下述幾種情況只能用基因診斷方法而不能依賴(lài)于免疫這診斷技術(shù):
①在血清學(xué)結果模棱兩可不能得出結論時(shí),或血清學(xué)指標與臨床表現不符。
②使用疫苗或特異性抗血清治療或免疫后的病例,用免疫學(xué)指標已經(jīng)不能反應病原體感染的程度。
③大部分病原體可以整合入細胞內成為為整合型,免疫學(xué)方法只能測其細胞外表型。
④獻血員的篩選試驗僅采用免疫技術(shù)是不夠的,如配合PCR方法可提高篩選試驗的可靠性。
⑤某些病原體感染后,特異抗體的產(chǎn)生并不意味著(zhù)臨床恢復及感染消失。
但是,與免疫學(xué)技術(shù)相比,基因檢測所顯示的優(yōu)越性也恰恰是它的缺陷,因為我們只能通過(guò)它來(lái)判斷病原體的有無(wú)和量的多少,至于病原體進(jìn)入體內之后,機體作出了何種反應?反應的結果如何?基因檢測結果不能對此作出全面的回答。眾所周知,感染后的免疫應答,是感染病學(xué)和免疫學(xué)的重要研究?jì)热荩彩桥袛啾桓腥菊卟∏椤⒅委煼磻㈩A后,以及流行病學(xué)調查的重要依據。客觀(guān)地講,基因檢測和免疫學(xué)檢測技術(shù)是具有互補性的。
2)基因診斷是病原學(xué)診斷的組成部分 傳統的病原學(xué)檢測是指病原體的分離培養,如細菌、病毒的分離和培養,但分離和培養技術(shù)迄今尚不能被運用于所有病原體,如某些病毒至今無(wú)法作形態(tài)觀(guān)察;某些細菌在體外培養的條件非常苛刻,或生長(cháng)時(shí)間太長(cháng)(如結核分枝桿菌)等,均難以把分離培養作為檢測這類(lèi)病原體的常規手段;另外,不同的病期病原體的含量不同,因此培養后的陽(yáng)性率不同;再有,用藥會(huì )直接影響到細菌培養的陽(yáng)性率。上述種種都是病原體分離培養存在的缺陷。基因檢測技術(shù)基本上可以彌補上述不足,成為病原體分離培養的補充。基因診斷方法還是細菌病毒等鑒定的簡(jiǎn)便、特異和快捷的手段。近年來(lái),基因診斷技術(shù)在病毒的基因分型方面更是發(fā)揮了巨大的作用。但是,基因診斷不可能完全取代病原體直接分離、培養、鑒定技術(shù)。對某些病原體而言,基因診斷的特異性問(wèn)題尚未完全解決;細菌對藥物的敏感度測試問(wèn)題目前還不能完全用基因診斷法來(lái)解決;某種病原體的毒性,如病毒的細菌毒性測定也不能用基因診斷法完成;病原體的形態(tài)學(xué)研究更是不能為基因診斷取代。
3)基因診斷是一種微量和快速診斷技術(shù) 在標本量很少,或需要快速獲取結果時(shí),PCR法很有優(yōu)勢。PCR法所需標本量很少,少至1μl也能取得陽(yáng)性結果。
4)基因診斷對原始標本的要求不高 這一點(diǎn)是其他現有技術(shù)無(wú)法比擬的。DNA不象蛋白質(zhì)(抗原或抗體)那樣容易失活,因此,無(wú)論是液性的還是干燥了的標本;也無(wú)論是污染的還是非污染的標本,都可用于基因檢測。更具優(yōu)勢的是,任何標本都可以通過(guò)純化或抽提以供基因檢測,這就避免了標本中可能存在的污染物和毒性物質(zhì)對檢測過(guò)程的干擾。
2.采用何種基因診斷技術(shù)
我們可以根據對敏感度的要求、實(shí)驗室的條件、實(shí)驗人員的技能、標本的質(zhì)量、標本性質(zhì)、標本中待測基因的含量、臨床需要等來(lái)選擇檢測方法。對敏感度要求不高時(shí)可用雜交法;實(shí)驗室條件較好可開(kāi)展PCP診斷技術(shù);標本最較少、污染嚴重或含雜質(zhì)較多以PCR法為宜;標本中待測基因含量很低也以PCR法為佳;檢測組織細胞內的基因表達或定位應采用原位雜交;觀(guān)察藥物抗病原體的療效,應采用基因定量分析技術(shù)。基因診斷技術(shù)發(fā)展很快,在方法上可供臨床醫生選用的余地很大,但與其他任何一種實(shí)驗室診斷技術(shù)一樣,它仍然受制于某些條件,選擇時(shí)應加以考慮。
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