【PPT】【專(zhuān)家講座】血液乙肝、丙肝和艾滋病病毒核酸檢測技術(shù) - 醫學(xué)資源下載
2013-08-26 05:00
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醫學(xué) -
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上傳日期:2013-07-30 14:09:38
血液乙肝、丙肝和艾滋病病毒核酸檢測技術(shù)及應用
浙江省血液中心
朱發(fā)明
2010-04
提綱
輸血風(fēng)險
血液NAT篩查
必要性
NAT篩查現狀
現有技術(shù)
實(shí)時(shí)熒光PCR
轉錄介導擴增技術(shù)
國內數據情況
實(shí)施過(guò)程中的要點(diǎn)
結果分析解釋要點(diǎn)
進(jìn)展與動(dòng)態(tài)
輸血風(fēng)險
輸血不良反應的比例
殘留風(fēng)險的來(lái)源
感染窗口期 90%以上
現有試劑未檢測病毒變異 (種屬,亞型)
感染后免疫沉默攜帶者(抗體陰性)
持續病毒感染但血清學(xué)陰性
比較罕見(jiàn) HCV事例
2 例標本HCV RNA陽(yáng)性,6個(gè)月后HCV抗體陰性(120萬(wàn)檢測標本)
錯誤 (人為錯誤)
0.05% 確認陽(yáng)性人為偏差為陰性 (Busch et al. Trans. 2000)
核酸檢測的必要性和可行性
存在殘留風(fēng)險
數據未知
窗口期事件 90%以上
ELISA檢測技術(shù)不足
**要求
社會(huì )期望
行業(yè)需求
核酸技術(shù)日趨成熟
經(jīng)濟的發(fā)展
關(guān)注輸血傳播性疾病
HBV 早期感染標志物
HCV 早期感染標志物
HIV-1流行
HIV 早期感染標志物
NAT檢測的現狀
國際上
1990s’歐洲開(kāi)始對血液制品進(jìn)行核酸檢測(HIV,HCV)
1996年美國開(kāi)始評估NAT技術(shù)在血站的應用
中國香港,新加坡,馬來(lái)西亞,印尼等周邊國家采用NAT技術(shù)
檢測(單檢、混樣)
國內情況
血站早期研究數據
部分血站進(jìn)行NAT檢測
血站大規模試點(diǎn)
血制品要求進(jìn)行篩選(pool)
NAT技術(shù)
病原體核酸檢測技術(shù)(nucleic acid testing)是直接檢測病原體核酸的一系列技術(shù)的總稱(chēng)
NAT敏感性高
檢測核酸
大大縮短“窗口期”
可使輸血傳播疾病的危險性降低
NAT檢測的技術(shù)方法
在PCR的基礎上衍生
PCR技術(shù)
實(shí)時(shí)熒光定量PCR
TMA(轉錄介導的擴增系統)
其他:NASBA, bDNA
大樣本量血液篩查的擴增技術(shù)
PCR技術(shù)
TMA技術(shù)(轉錄介導的擴增系統(transc**tion mediated amplification)
不同的技術(shù)平臺:
PCR技術(shù)
PCR技術(shù)
衍生的技術(shù)
RT-PCR
巢式PCR
多重PCR
PCR-SSP
不對稱(chēng)PCR
熒光定量PCR
TaqMan探針?lè )?
TaqMan作用原理
轉錄介導的擴增方法 (TMA)
轉錄介導的擴增系統(transc**tion mediated amplification,TMA)
諾華診斷
鼠白血病病毒逆轉錄酶和T7 RNA多聚酶
在等溫條件下來(lái)擴增RNA或DNA的反應系統
核酸序列依賴(lài)擴增系統(nucleic acidssequence based amplification, NASBA)
荷蘭產(chǎn)品
原理類(lèi)似TMA
靶標擴增
NAT檢測數據及其效果
NAT提高血液安全水平
國內數據
上海血液中心
美國Chiron Procleix HIV-1/HCV
8人份(36800)
24 人份混合(66739);
HCV NAT+: 0/103539
HIV NAT+: 0/103539
ELISA為進(jìn)口試劑、國產(chǎn)
中國輸血雜志,2003,16(3):157-160
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