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    對原發(fā)腫瘤反復進(jìn)行組織活檢有時(shí)候并不方便，無(wú)論在倫理還是實(shí)際操作上均有一定難度，并且可能延誤治療和導致并發(fā)癥的產(chǎn)生。因此，利用外周血（游離DNA、循環(huán)腫瘤細胞等）建立實(shí)時(shí)、動(dòng)態(tài)、無(wú)創(chuàng )、定量的分子檢測體系有重要的意義。目前國際上多個(gè)研究小組更多的探尋利用外周血游離DNA或循環(huán)腫瘤細胞行全基因組/外顯子組分析以指導個(gè)體化治療的可行性。

    腫瘤是基因組疾病，故單一基因檢測難以滿(mǎn)足指導個(gè)體化治療的需要。近期多項研究利用二代測序技術(shù)分析了血漿游離DNA基因組、外顯子組改變與治療療效的關(guān)系。循環(huán)腫瘤細胞是有關(guān)外周血分子標志物研究的另一焦點(diǎn)。其作為完整的、無(wú)損傷的腫瘤細胞，能反應腫瘤的轉移、耐藥、進(jìn)展等過(guò)程。

    在該研究中，研究人員比較了循環(huán)腫瘤細胞中基于血液KRAS突變分析和循環(huán)血漿DNA用于預測肺癌原發(fā)性腫瘤突變這兩種方法來(lái)替代組織活檢的可行性。

    研究人員通過(guò)利用cobas4800（羅氏）等位基因特異性PCR技術(shù)檢測肺癌患者KRAS突變狀態(tài)，該技術(shù)的原理是在基因組的某些非編碼區，一些短的序列 ( 十幾至一百多個(gè)堿基 ) 可重復多次，并按照孟德?tīng)栠z傳法則呈共顯性遺傳。這種等位基因的多態(tài)性常達十個(gè)以上，因此這種遺傳標記帶有很大的信息量。除了等位基因的遺傳多態(tài)性分析外,還應用于點(diǎn)突變的檢測。

    通常只需采集病人9ml血標本就可以檢測，利用ScreenCell MB裝置捕獲循環(huán)腫瘤細胞，DNA通過(guò)人類(lèi)組織和細胞DNA提取試劑盒（QIAGEN試劑盒）從循環(huán)腫瘤細胞中提取出。通過(guò)自定義設計的高分辨率溶解法檢測KRAS基因突變，并通過(guò)QIAGEN試劑盒進(jìn)行焦磷酸測序。

    91例接受肺癌切除手術(shù)患者中，通過(guò)福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）進(jìn)行組織活檢的18例，通過(guò)外周血游離DNA檢測的17例，循環(huán)腫瘤細胞檢測的47例。研究發(fā)現，以血液為基礎檢測KRAS突變試驗中，外周血游離DNA檢測的敏感度和特異度分別為81%、97%；循環(huán)腫瘤細胞檢測的敏感度和特異度分別為86%、38%。

    該研究結果表明，以血液為基礎的突變試驗用于預測肺癌原發(fā)性腫瘤基因突變是可行的。就腫瘤異質(zhì)性而言，與循環(huán)腫瘤細胞相比，循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）對腫瘤負荷的影響更大，并且更密切說(shuō)明了腫瘤的突變。