艾滋病補充試驗的簡(jiǎn)單介紹
2018-09-18 17:55
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來(lái)源：愛(ài)愛(ài)醫
作者：張鳳林
責任編輯：點(diǎn)滴管
[導讀] HIV檢測的初篩結果如果為陽(yáng)性，按照規范的檢測流程，將進(jìn)入到HIV的補充試驗，做進(jìn)一步的檢測。
HIV檢測的初篩結果如果為陽(yáng)性，按照規范的檢測流程，將進(jìn)入到HIV的補充試驗，做進(jìn)一步的檢測。下面就艾滋病的主要的補充試驗，做一個(gè)淺顯的介紹。
一、何謂補充試驗
在《全國艾滋病檢測技術(shù)規范》（2009版）中，如篩查結果為陽(yáng)性的樣本，將進(jìn)行下一步的確證試驗，而在2015版中，國家將核酸試驗以及特定條件下的替代檢測，和確證試驗一起作為補充試驗，其檢測結果都是可以作為判定是否感染艾滋病病毒的重要依據。
補充試驗是通過(guò)檢測樣本中是否存在艾滋病病毒抗體、抗原或者核酸而確定艾滋病病毒感染的檢測方法。
補充試驗一般指：抗體確證試驗，核酸試驗，在特定條件下的替代檢測。
抗體確證試驗包括免疫印跡試驗，條帶/線(xiàn)性免疫試驗，這個(gè)是在日常工作中最常使用的檢測方法。
核酸試驗主要是對一些特殊的人員使用這種方法，結合臨床，來(lái)判斷是否感染了艾滋病病毒。
替代檢測包括三種酶聯(lián)免疫試驗、三種快速試驗或酶聯(lián)免疫加快速試驗。
二、確證試驗
目前在實(shí)際工作中常用的確證試驗，包括免疫印跡試驗（WB），條帶/線(xiàn)性免疫試驗（RIBA/LIA）。
1、免疫印跡試驗WesternBlot（WB）：
WB采用間接法檢測樣品中的抗HIV-1/HIV-2特異性抗體。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳把分子量大小不等的HIV-1蛋白分離開(kāi)來(lái)，然后再把這些分離的不同蛋白帶轉移到硝酸纖維素膜上（或PVDF膜）。將此膜切割成條狀，每一膜條上均含有經(jīng)電泳分離過(guò)的HIV抗原。待測樣品經(jīng)適當稀釋后，加至硝酸纖維素膜上，恒溫震蕩，使其充分接觸反應，血清中若含有HIV抗體，就會(huì )與膜條上抗原帶相結合。加入抗人-IgG酶結合物和底物后，根據出現條帶情況,按照試劑盒說(shuō)明書(shū)判定標準，判斷待測樣品為陽(yáng)性、陰性或不確定。
WB是目前特異性、敏感性均比較好的證實(shí)HIV感染的方法。也是國內HIV確認的首選方法，它是在DNA印跡術(shù)的基礎上發(fā)展而來(lái)的新型技術(shù)。據報道，WB試驗有2％的假陽(yáng)性，多見(jiàn)于伴有自身免疫性疾病或打過(guò)疫苗的患者。如果將EIA和WB結合起來(lái)進(jìn)行HIV特異性抗體檢測,可以將檢測結果的準確率提高至99％，假陽(yáng)性率0.0006%。
2、條帶/線(xiàn)性免疫試驗（RIBA/LIA）
RIBA/LIA采用間接法檢測樣品中的抗HIV-1/HIV-2特異性抗體，試劑盒的膜條上包被有HIV-1/HIV-2不同的重組抗原片段，加入待測樣品后，其中的相應抗體與抗原發(fā)生特異性的免疫反應；隨后加入抗人IgG（堿性磷酸酶標記）與HIV特異性IgG抗體相結合；加入顯色底物后，在堿性磷酸酶的催化下，特異性抗體的結合部位出現肉眼可見(jiàn)的條帶,按照試劑盒說(shuō)明書(shū)判定標準，判斷待測樣品為陽(yáng)性、陰性或不確定。
這個(gè)方法的原理和WB和相同的，只是由于膜條包被的是基因工程表達的或合成肽HIV重組抗原片段，不像是WB上的自然的滅活全病毒抗原，由于人工重組后，抗原的純度較高，減少了一些干擾物質(zhì)，所以特異性較好，不確定結果相對減少30%～60%，但同時(shí)由于只是選取了一些相對比較特異的條帶，而不是全病毒的所有條帶，所以敏感性相對要低一些，假陰性要高一些。
3、結果判斷
確認方法的結果是要根據不同廠(chǎng)家的說(shuō)明書(shū)來(lái)做判斷的，看出現不同的條帶來(lái)做判斷，其中HIV-1抗體特異帶包括：env帶：gp160/gp120、gp41；gag帶：p55、p24、p17（或p18）；pol帶：p66（或p65）、p51、p31。HIV-2抗體特異條帶包括：env帶：gp140/gp105、gp36；gag帶：p56、p26、p16；pol帶：p68、p53、p34。（由于使用的毒株不同，HIV-2env帶也可為gp125/gp80、gp36）。
一般是需要同時(shí)符合以下2條標準可判為HIV-1抗體陽(yáng)性：①至少有2條env帶（gp41和gp160/gp120）出現，或至少1條env帶和p24帶同時(shí)出現；②符合試劑盒提供的陽(yáng)性判定標準。對于出現HIV-2型特異性指示帶的樣品：如果同時(shí)呈HIV-1抗體陽(yáng)性反應，報告HIV-1抗體陽(yáng)性，不推薦進(jìn)一步做HIV-2抗體確證試驗；如果同時(shí)呈HIV-1抗體不確定或陰性反應，需用HIV-2型確證試劑再做HIV-2的抗體確證試驗。
出現HIV抗體特異帶，但不足以判定陽(yáng)性，結果為不確定。
無(wú)HIV抗體特異帶出現，結果可判為陰性。
以下為幾種常見(jiàn)試劑盒的結果判斷：
三、核酸試驗
核酸檢測是對感染者體內游離病毒的核酸RNA含量進(jìn)行測定。通常使用血漿作為檢測樣品，根據不同檢測要求改進(jìn)的RNA提取技術(shù)使該實(shí)驗也可用于多種體液及組織。
核酸檢測作為補充實(shí)驗可用于HIV-1感染診斷，包括抗體復檢試驗有反應和抗體補充試驗不確定樣本的判定；急性期和晚期感染者的診斷。
針對對HIV-1抗體篩查陰性、近期有流行病學(xué)史的個(gè)體,或確證結果不確定的樣本,核酸檢測可用于診斷HIV-1急性期感染。
針對HIV-1抗體篩查陽(yáng)性或確證結果不確定的個(gè)體，結合流行病學(xué)史和臨床病史，核酸檢測可用于HIV-1感染診斷。艾滋病晚期患者可能出現HIV抗體反應不確定，可根據HIV核酸檢測結果，結合臨床病史和CD4+T淋巴細胞計數等情況，進(jìn)行綜合判斷，確定臨床診斷。
但核酸檢測結果低于最低檢測限并不能完全排除HIV-1感染。
1、核酸定性試驗：
全球目前正式用于臨床診斷HIV-1急性期感染的核酸檢測試劑比較少，主要是美國FDA批準的Gen-Probe公司生產(chǎn)的AptimaHIV-1RNA核酸定性檢測試劑和歐盟批準的AbbottM2000HIV-1RNA/DNA定性檢測試劑。國內生產(chǎn)的用于血漿及其血液制品篩查的核酸檢測試劑主要為T(mén)aqman實(shí)時(shí)熒光PCR檢測試劑。
檢測結果顯示“有反應”或“檢測到”，報告陽(yáng)性；檢測結果顯示“無(wú)反應”或“未檢測到”，報告陰性。核酸定性檢測值低于最低檢測限的結果，不能排除HIV-1感染，需根據流行病學(xué)史、臨床病史和實(shí)驗室相關(guān)指標進(jìn)行綜合判斷。
2、核酸定量試驗：
核酸定量檢測原理主要基于靶核酸擴增RT-PCR和信號放大擴增，目前使用的病毒載量檢測技術(shù)主要有三種：1、逆轉錄多聚酶鏈反應系統（RT-PCR）2、分支DNA信號擴大系統（bDNA）3、核酸序列擴增系統（NASBA），三種技術(shù)都有核酸提取、擴增或信號放大、定量檢測三部分組成。
定量的核酸檢測可以作為HIV-1感染的確認，但更多的是作用是監測抗病毒藥物治療效果和監測疾病進(jìn)展。
核酸定量檢測過(guò)程中，由于可能會(huì )受到的污染，從而導致低病毒檢測值的結果，所以一般是以5000CPs/ml作為判斷結果的閾值，檢測值>5000CPs/ml(或IUs/ml)，報告檢測值；檢測值≤5000CPs/ml(或IUs/ml)，需再次采樣檢測，報告檢測值，結果>5000CPs/ml(或IUs/ml)，報告檢測值，結果仍≤5000CPs/ml，則需充分結合流行病學(xué)史、臨床病史、CD4+T淋巴細胞計數和HIV-1抗體隨訪(fǎng)檢測結果等進(jìn)行綜合判斷。
目前國內外均沒(méi)有商品化的HIV-2核酸檢測試劑。
四、替代檢測：
替代檢測一般在一些特定條件下使用這種檢測策略，例如高流行地區（流行率大于5%）、高危人群（如男***性戀，***人群），就是用三種酶聯(lián)免疫、三種快速試驗或酶聯(lián)加快速試驗，進(jìn)行檢測，這個(gè)三種試劑均要經(jīng)過(guò)使用地區中心實(shí)驗室的評價(jià)。這個(gè)一般適用于某些特定的專(zhuān)項調查工作，在日常的工作中基本不使用這種方法。
五、補充試驗的檢測流程：
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