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游離脂肪酸做好作為常規臨床檢測的準備了嗎

2012-07-17 14:33 閱讀:4723 來(lái)源:張化冰,肖新華 責任編輯:潘樂(lè )樂(lè )
[導讀] 1963年,Randel等提出了葡萄糖-脂肪酸循環(huán)學(xué)說(shuō),認為葡萄糖和脂肪酸的氧化代謝存在相互競爭,提示脂肪酸在代謝中存在重要作用。近來(lái)的研究發(fā)現,血漿游離脂肪酸(free fatty acid,FFA)濃度的升高與糖尿病、動(dòng)脈硬化以及多種代謝疾病均有密切的關(guān)系,因此在

    1963年,Randel等提出了“葡萄糖-脂肪酸循環(huán)”學(xué)說(shuō),認為葡萄糖和脂肪酸的氧化代謝存在相互競爭,提示脂肪酸在代謝中存在重要作用。近來(lái)的研究發(fā)現,血漿游離脂肪酸(free fatty acid,FFA)濃度的升高與糖尿病、動(dòng)脈硬化以及多種代謝疾病均有密切的關(guān)系,因此在各種代謝疾病中進(jìn)行FFA的研究已經(jīng)成為內分泌代謝領(lǐng)域的一個(gè)熱點(diǎn)。

    最開(kāi)始FFA采用萃取滴定法或氣相色譜法和高效液相層層析法測定,相當復雜,花費也比較高,主要在基礎研究中使用,難以進(jìn)入臨床實(shí)用。現在FFA可以采用通過(guò)自動(dòng)分析儀進(jìn)行快速大量的測定,在國內部分醫院中FFA已經(jīng)成為臨床的常規檢測,可以直接作為血脂檢查的一個(gè)項目進(jìn)行化驗,檢測方便,花費也很小,能夠為臨床提供更多的幫助。但是判斷FFA的結果和判斷其他血脂檢查的結果一樣嗎?患者一次FFA結果異常我們如何和患者解釋呢?很多人可能對FFA具體的測定方法、結果的穩定性和可能的干擾因素還不太了解,我們有必要對FFA的測定進(jìn)行比較深入的了解。

    FFA實(shí)際上更加準確的稱(chēng)呼是非酯化脂肪酸或未酯化脂肪酸(non-esterified fatty acid,NEFA),它與酯化的脂肪酸如甘油三酯等相對應。FFA約占血總脂肪酸的10%。血中脂肪酸主要為長(cháng)鏈脂肪酸,一般不溶于水,在血中FFA與白蛋白結合進(jìn)行運輸,是一種簡(jiǎn)單的脂蛋白。所以FFA中游離的意義和游離睪酮或游離皮質(zhì)醇的意義是不一樣的,FFA中的游離主要是指非酯化,它實(shí)際上是和白蛋白結合的,而游離睪酮或游離皮質(zhì)醇中的游離是指未和結合蛋白結合的激素,我們應該注意這個(gè)區別。

    目前臨床上的FFA測定主要通過(guò)酶學(xué)比色法進(jìn)行測定,又稱(chēng)為ACS-ACOD法。其原理是FFA首先在乙酰輔酶A合成酶(Acyl-CoA synthetase,ACS)的催化下變?yōu)橹]o酶A,然后脂酰輔酶A在脂酰輔酶A氧化酶(Acyl-CoA oxidase,ACOD)的催化下產(chǎn)生過(guò)氧化氫,過(guò)氧化氫與顯色劑進(jìn)行反應后產(chǎn)生藍紫色的物質(zhì),可以吸收550 nm波長(cháng)的光,從而可以通過(guò)比色法進(jìn)行FFA濃度的測定。從中可以看出,ACS-ACOD法并不是直接測定FFA的濃度,而是通過(guò)它產(chǎn)生的過(guò)氧化氫進(jìn)行間接的比色測定,因此測定時(shí)存在受到氧化-還原物質(zhì)和含顏色物質(zhì)的影響的可能。通過(guò)ACS-ACOD法測定FFA,各單位需要在本單位的試驗條件下確定各自的正常值,因此可能不同醫院正常值會(huì )有所不同。

    在判斷FFA的臨床意義之前我們首先要了解FFA的代謝途徑。FFA是機體的主要能量物質(zhì),人體的50%~90%熱能需要由血漿中循環(huán)的FFA供給。正常人體以這種方式每小時(shí)周轉的脂肪酸量高達25 g。FFA的半衰期僅有1~2 min。因此FFA的變化是比較快的。FFA的來(lái)源是從消化道吸收入血,脂蛋白脂酶水解脂蛋白復合物中的甘油三酯或膽固醇酯,脂肪細胞內的脂酶水解儲存的甘油三酯。其中最主要的是脂肪細胞內的脂酶水解儲存的甘油三酯,有多個(gè)激素可以影響這一過(guò)程。影響該過(guò)程的激素首先也是胰島素,胰島素是一個(gè)促進(jìn)脂肪合成的激素,在進(jìn)餐后抑制脂肪分解,所以餐后FFA減少,而饑餓時(shí)FFA增加。β腎上腺素系統是非常重要的促進(jìn)脂肪分解的機制,運動(dòng)和應激可以通過(guò)腎上腺素分泌增加FFA的含量。

    從以上影響因素可以看出饑餓和運動(dòng)可以造成生理性的FFA增加。所以應該注意抽血的時(shí)間,FFA的測定患者需要空腹,但空腹時(shí)間過(guò)長(cháng)脂肪分解增加也可以增加FFA的濃度,抽血前要盡量避免劇烈運動(dòng)和應激,隨機采取血漿測定FFA在臨床上是沒(méi)有意義的。FFA在抽血后需要馬上進(jìn)行測定,這是因為血中的脂肪酶如脂蛋白脂酶和磷脂酶等可以水解脂肪產(chǎn)生FFA,因此如果放置一段時(shí)間后再進(jìn)行測定可能會(huì )假性增加FFA的濃度。所以要想非常準確地測定FFA,最好預冷抽血的試管,整個(gè)檢測均在冰上進(jìn)行。如果不能及時(shí)測定可以冰凍保存,而4 ℃時(shí)血標本可以保存2 d。另外血中甘油三酯水平很高(>1000 mg/dl)時(shí),離體標本中脂肪酶分解產(chǎn)生的FFA會(huì )更多,使結果出現假性增高[3]。由于肝素可以增加脂蛋白酯酶的活性,增加血中的FFA濃度,因此在使用肝素抗凝的患者中FFA的測定是不可靠的,從由肝素抗凝的套管針中抽血也有可能對FFA的測定產(chǎn)生很大影響,另外抽血時(shí)不能使用肝素抗凝的抽血管,而乙二胺四乙酸(EDTA)、枸櫞酸等抗凝不會(huì )影響FFA的測定。雖然ACS-ACOD法需要用到氧化反應及比色法,但是一般來(lái)說(shuō),維生素C和溶血不會(huì )影響結果,膽紅素可能會(huì )輕度減少測定值。

    從上一段我們可以看到,FFA由于受到的干擾因素較多,包括空腹時(shí)間的長(cháng)短、抽血前運動(dòng)的情況,甚至前一天的飲食和運動(dòng)都有可能對結果產(chǎn)生較大影響,所以不同日期測定結果也會(huì )有較大的波動(dòng)。在一個(gè)研究中[4],對12位健康個(gè)體進(jìn)行了連續12 d的空腹常見(jiàn)代謝變量(包括血糖、甘油三酯和FFA等)的測定,結果發(fā)現,同一個(gè)體的FFA在不同日期測定有著(zhù)相當大的波動(dòng),個(gè)體內變異達到45%,而個(gè)體間變異(不同個(gè)體之間的差別)則只有32%,也就是說(shuō)不同日期的個(gè)體內變異超過(guò)了個(gè)體間變異。而在同一個(gè)實(shí)驗中空腹血糖測定的個(gè)體內變異是4.8%,個(gè)體間變異是7.5%,所以一次的空腹血糖測定能夠相對比較準確地反應患者平時(shí)的血糖水平。而空腹甘油三酯水平的個(gè)體內變異為21%,個(gè)體間變異為20%,甘油三酯的個(gè)體內測定變異水平是比較高的,我們在臨床工作中也會(huì )有體會(huì ),今天測定的甘油三酯水平可能會(huì )與過(guò)幾天測定的甘油三酯水平有比較大的差別。在許多研究中甘油三酯水平不能獨立地預測心血管疾病的風(fēng)險,甘油三酯測定波動(dòng)大也是其中的重要原因之一。與之對比,高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)與甘油三酯水平呈非常好的負相關(guān),但不同日期測定的波動(dòng)非常小,因而在多變量分析中發(fā)現HDL-C與心血管疾病的相關(guān)性要比甘油三酯水平與心血管疾病的相關(guān)性更好。而FFA的個(gè)體內變異水平還要高于甘油三酯,這就對單獨一次測定FFA能否作為一個(gè)準確的指標打上了問(wèn)號。我們知道,對于水平波動(dòng)比較大的代謝指標,我們可以采取多次測定取平均值的方法來(lái)更準確地判斷,對于FFA,需要測定15次取平均值才能有80%的把握使結果的準確度控制在±15%之內。而對于空腹血糖,測定一次就可以達到相同的把握度,空腹甘油三酯則需要測定3次取平均值。因此,從統計學(xué)角度,FFA的一次測定結果可能不能準確地反應個(gè)體的實(shí)際情況。

    在對FFA濃度結果進(jìn)行判定時(shí)還有一個(gè)需要注意的問(wèn)題,即FFA可以有不同的長(cháng)度和不同的飽和度,我們測定的FFA實(shí)際上是這些不同長(cháng)度和飽和度的脂肪酸的混合物。正常血清中十八碳的油酸占54%,十六碳的軟脂酸占34%,十八碳的硬脂酸占6%,另外還有少量十二碳的月桂酸、十四碳的肉豆蔻酸和二十碳的花生四烯酸。不同的脂肪酸,如飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸起的作用是不一樣的,飽和脂肪酸對代謝產(chǎn)生不良影響,而不飽和脂肪酸則對飽和脂肪酸的不良影響有保護作用。飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸之間的比例受到食物中這兩種成分比例的影響。所以,單從FFA的總濃度有時(shí)不能精確地判斷脂肪酸的作用是有益的還是有害的,如果能結合其中飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸的比例進(jìn)行分析,可能更有利于預后的判斷。具體測定不同脂肪酸的含量一般需要使用高效液相色譜法,目前還不能進(jìn)入常規的臨床使用。

    綜上所述,FFA在技術(shù)上已經(jīng)可以方便快捷地在臨床工作中進(jìn)行測定,但由于FFA水平受到的干擾因素較多,在分析結果時(shí)首先要注意標本采集的條件,是否為空腹,抽血前避免劇烈運動(dòng)和應激,抽血后標本是否及時(shí)送檢;其次由于FFA的個(gè)體內變異水平較大,單次抽血結果的分析需要謹慎。隨著(zhù)FFA測定在臨床工作中更多的應用,我們需要更多的總結這項指標的臨床意義,以便更好地為臨床工作服務(wù)。(游離脂肪酸做好作為常規臨床檢測的準備了嗎 張化冰,肖新華)


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