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實(shí)驗室里最危險的東西是什么?

2015-04-02 21:15 閱讀:2632 來(lái)源:丁香園 作者:學(xué)**涯 責任編輯:學(xué)海無(wú)涯
[導讀] 很多因素都可以影響實(shí)驗的成敗,一個(gè)小小的失誤,可能就會(huì )毀掉一個(gè)實(shí)驗。而有些因素,卻可能導致很多實(shí)驗都失敗。這樣的因素,便是我所認為的“實(shí)驗室里最危險的東西”.

    危險,既可以指危及人身安全,即有毒物品,也可以指導致實(shí)驗失敗的因素。本文所說(shuō)的危險,指的是第二種含義。

    很多因素都可以影響實(shí)驗的成敗,一個(gè)小小的失誤,可能就會(huì )毀掉一個(gè)實(shí)驗。而有些因素,卻可能導致很多實(shí)驗都失敗。這樣的因素,便是我所認為的“實(shí)驗室里最危險的東西”.

    1. 空氣

    我們不是在真空里面做實(shí)驗,即使大部分時(shí)候試劑是蓋上的,但是總有接觸空氣的時(shí)候。如果空氣質(zhì)量不好,例如灰塵含量過(guò)高,細菌、真菌含量太多,就非常容易污染試劑,導致實(shí)驗失敗。

    所以,最好定期檢測空氣的質(zhì)量。可以用不加氨芐西林的LB培養皿暴露于空氣中一小時(shí),然后37度孵育一天,看有多少細菌克隆來(lái)檢測細菌含量(這個(gè)我沒(méi)做過(guò)),用加氨芐西林的LB培養皿暴露于空氣中一小時(shí),室溫下避光孵育3天,看有多少真菌克隆來(lái)檢測真菌含量。如果細菌和真菌很多,一定要非常注意無(wú)菌技術(shù)。

    我曾經(jīng)用LB培養皿檢測過(guò)空氣中的真菌,結果見(jiàn)下圖。但是,專(zhuān)門(mén)用于培養真菌的Sabouraud Agar plate http://www.microbelibrary.org/component/resource/laboratory-test/3156-sabouraud-agar-for-fungal-growth-protocols 應該效果更好。

    這是我在做大腸桿菌培養的時(shí)候發(fā)現有真菌污染之后做的空氣中真菌含量檢測。左側是放在試驗臺上一個(gè)小時(shí),右側是放在室外一個(gè)小時(shí)。可見(jiàn),室內空氣中有真菌,但是比室外要少。

    為了保持實(shí)驗室內的空氣質(zhì)量,應該定期打掃實(shí)驗室,因為地板、實(shí)驗臺上的灰塵在走動(dòng)時(shí)會(huì )揚起,角落里的垃圾可能是細菌和真菌的良好培養基。同時(shí),一般來(lái)說(shuō)實(shí)驗室外面的空氣中細菌真菌含量高于實(shí)驗室內,所以最好不要開(kāi)窗。

    2. 水

    幾乎所有的試劑都是在溶液中起反應,所以做實(shí)驗的時(shí)候,一定要保證水的質(zhì)量合格。如果水的質(zhì)量不達標,實(shí)驗失敗在所難免。我就在網(wǎng)上看到有人說(shuō)當他們用Milli –Q water去清洗玻片的時(shí)候,組織從玻片上掉下來(lái),而換用普通的水之后,問(wèn)題就消失了, 見(jiàn)http://www.ihcworld.com/smf/index.php?topic=2401.0 (當然,這個(gè)不一定完全可靠,因為沒(méi)有做嚴格的對照和重復)。在《At the Bench》一書(shū)里,作者寫(xiě)道:很多人都知道,有些實(shí)驗僅僅是因為換了一種配溶液的水就做不出來(lái)了。

    在我們這里,如果系統沒(méi)有問(wèn)題的話(huà),Milli-Q 水可以滿(mǎn)足絕大部分實(shí)驗的要求。對于用水純度要求高的實(shí)驗,例如原位雜交,最好用公司購買(mǎi)的配好的溶液。如果實(shí)驗出現問(wèn)題懷疑是水的質(zhì)量所致,可以用公司購買(mǎi)的水作為對照檢驗其質(zhì)量。

    3.  Pipette(移液器)

    幾乎所有操作都要用到移液器,如果移液器污染,則可能導致實(shí)驗失敗。所以,要保持移液器清潔,移液的時(shí)候,要防止液體進(jìn)入移液器。有些實(shí)驗例如RNA操作,最好用filter tip 以防止移液器里的RNase或者微生物進(jìn)入樣品。

    去除移液器表面的RNase的方法:我從網(wǎng)上看到的方法是用10%的bleach清洗。但是導師說(shuō)bleach會(huì )破壞移液器的塑料,所以他建議我先用普通的清潔劑清洗,然后用70%的酒精清洗。不知道有沒(méi)有更好的方法?

    4.  EP管和槍頭

    很多反應是在EP管中進(jìn)行的,很多試劑分裝于EP管中,絕大部分的移液都要用到槍頭。如果EP管和槍頭被污染,自然會(huì )對實(shí)驗有影響。我所用過(guò)的EP管和槍頭都沒(méi)有遇到過(guò)問(wèn)題,但是我記得曾經(jīng)看過(guò)一篇SCIENCE的報道說(shuō)一次性塑料實(shí)驗用品會(huì )釋放出微量的物質(zhì)。作者在用單胺氧化酶B做試驗的時(shí)候,發(fā)現酶的活性被抑制,于是檢測了不同品牌的tube和tip,果然發(fā)現了能夠抑制該酶活性的物質(zhì):di(2-hydroxyethyl)methyldodecylammonium,9-octadecenamide.他們檢測的品牌包括著(zhù)名的Fisher Scientific(1)。

    絕大部分的EP管和槍頭都注明是“DNase and RNase Free”,但是,專(zhuān)門(mén)生產(chǎn)RNase抑制劑的Ambion公司卻說(shuō)不一樣是RNase free.所以,最近我在做原位雜交的實(shí)驗時(shí),就檢測了EP管的RNase.一管用***清洗,一管不清洗,然后加入RNA,37度孵育一小時(shí),電泳,結果沒(méi)有區別。當然,我孵育的時(shí)間不是很長(cháng),樣本量不大,也沒(méi)有重復。

    一般來(lái)說(shuō),EP管和槍頭不會(huì )對實(shí)驗有太大的影響,尤其是來(lái)自于知名品牌的產(chǎn)品。如果是非知名品牌,或者需要做非常敏感的實(shí)驗,還是有必要檢測的。

    5.  過(guò)期的試劑

    過(guò)期失效的試劑導致實(shí)驗失敗是再正常不過(guò)的了。所以,一般情況下不要使用過(guò)期的試劑,尤其不能使用別人的留下的過(guò)期試劑(我曾經(jīng)有過(guò)血的教訓)。有些試劑,例如抗體、酶,是容易變質(zhì)的,但是,一般情況下過(guò)了產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)所說(shuō)的保質(zhì)期還可以用。因為這些試劑比較貴,所以一般過(guò)了保質(zhì)期還會(huì )繼續使用。使用這樣的試劑,如果不清楚是否依然有效,就要設立對照來(lái)檢驗。例如,對于限制性?xún)惹忻福梢杂靡阎荒褪苊盖械馁|(zhì)粒+沒(méi)有問(wèn)題的buffer作為一個(gè)對照,檢驗酶的活性。

    最安全的地方就是最危險的地方,最不容易想到的導致實(shí)驗失敗的因素就是實(shí)驗室里最危險的東西。以上所說(shuō)的情況,一般都不會(huì )有問(wèn)題,但是如果實(shí)驗失敗,檢測了很多因素還是找不到原因,可能就需要懷疑這幾個(gè)因素了。

    參考文獻:

    1.  G. R. McDonald et al., Science 322, 917 (Nov, 2008)。


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